成年人及12岁以上儿童，体重50公斤以上儿童均使用成人剂量，通常剂量是1～2克，每日一次。
危重病人或由中度敏感菌引起的感染，剂量可增至4克，每日一次。
新生儿、婴儿及12岁以下儿童，建议以下剂量每日使用一次。
新生儿（14天以下）每日剂量为按体重20-50毫克/公斤，不超过50毫克/公斤，无需区分早产儿及足月婴儿。
婴儿及儿童（15天至12岁）每日剂量按体重20-80毫克/公斤。
体重50公斤或以上的儿童，应使用通常成人剂量。静脉剂量按体重50毫克/公斤以上时，输注时间至少要30分钟以上。
用药方法
新配制的溶液能在室温下保持其物理及化学稳定性达6小时或是在5℃环境下保持24小时，但按一般原则，配制后的溶液应立即使用。
肌肉注射：本品1.0克溶于1%盐酸利多卡因3.5毫升中用于肌肉注射，以注射于相对大些的肌肉为好，不主张在一处的肌肉内注射1克以上剂量。
利多卡因溶液绝对不能用于静脉注射。
静脉注射：本品1.0溶于10毫升无菌注射用水中用于静脉注射，注射时间不能少于2-4分钟。
静脉滴注：静脉滴注时间至少要30分钟，本品2克溶于40毫升以下其中一种无钙静脉滴注溶液中如：0.9%氯化钠溶液，0.45%氯化钠+2.5%葡萄糖溶液，5%葡萄糖，10%葡萄糖，5%葡萄糖中加6%葡聚糖，6-10%羟乙基淀粉静脉滴注溶液。由于可能会产生药物间的不相容性，故不能将本品与其他药物混合使用，需联合用药时应分开使用。
疗程 疗程取决于病程，与一般抗菌素治疗方案一样，在发热消退或得到细菌被清除的证据之后，应继续使用本品至少48至72小时。
特殊用药指导
脑膜炎：婴儿及儿童细菌性脑膜炎，开始治疗剂量每公斤体重100毫克（不超过4克），每日一次，一旦确认了致病菌及药敏试验结果，则可酌情减量，以下疗程已被证明是有效的：脑膜炎奈瑟氏菌：4天；流感嗜血杆菌：6天；肺炎链球菌：7天。
莱姆病：儿童及成人按体重50毫克/公斤，最大剂量2克每日一次，共14天。
淋病：治疗淋病（产青霉素酶及不产青霉素酶菌株）本品的推荐剂量为肌肉注射250毫克单剂。
术前预防性用药：预防污染或非污染手术后感染，根据感染的危险程度，推荐在术前30-90分钟，注射本品1-2克单剂。对结肠直肠手术者以本品单独使用或与5-硝基咪唑（如奥硝唑）联合用药（但分开使用）已被证实是有效的。
肝、肾功能不全：肾功能不全病人，如其肝功能无受损则无须减少本品用量，对晚期前肾功能衰竭病人（肌酐清除率＜10毫升/分），每日本品用量不超过2克。肝功能受损病人，如肾功能完好亦无须减少剂量。严重的肝、肾功能障碍者，应定期检查本品的血药浓度。
正在接受透析治疗的病人，无须在透析后另加剂量，由于这类病人的药物清除率可能会降低，故应进行血药浓度监测，以决定是否需要调整剂量。